紫外可見分光光度計(jì)是分析化學(xué)中常用的精密儀器，用于測(cè)定樣品對(duì)紫外-可見波段(200-800 nm)光的吸收特性。其操作涉及光學(xué)系統(tǒng)、電子元件和化學(xué)樣品的協(xié)同配合，需嚴(yán)格遵循規(guī)范流程以確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性和儀器穩(wěn)定性。以下是其使用細(xì)節(jié)的系統(tǒng)性總結(jié)：　　一、開機(jī)前準(zhǔn)備　　1. 環(huán)境檢查　　- 儀器需放置在平穩(wěn)臺(tái)面，避免振動(dòng)和強(qiáng)磁場(chǎng)干擾?！　? 室溫建議控制在15-25℃，濕度低于60%，防止光學(xué)元件受潮或結(jié)露?！　? 避免陽(yáng)光直射或強(qiáng)光照射，關(guān)閉儀器周圍其他光源?！　?. 儀器狀態(tài)確認(rèn)　　- 檢查電源電壓是否符合要求(通常為220V±5%)?！　? 清理樣品室，確保無(wú)殘留液體或固體雜質(zhì)?！　? 檢查比色皿是否清潔干燥，石英皿(用于紫外區(qū))和玻璃皿(用于可見區(qū))需分類放置。　　二、開機(jī)與預(yù)熱　　1. 啟動(dòng)程序　　- 打開主機(jī)電源，啟動(dòng)配套軟件(如配備電腦控制)。　　- 部分儀器需單獨(dú)開啟氘燈(紫外光源)和鎢燈(可見光源)，注意點(diǎn)亮順序(通常先開氘燈，后開鎢燈)?！　?. 預(yù)熱與校準(zhǔn)　　- 預(yù)熱：開機(jī)后需預(yù)熱15-30分鐘，使光源穩(wěn)定、電子系統(tǒng)達(dá)到熱平衡。　　- 波長(zhǎng)校準(zhǔn)：　　- 紫外區(qū)(200-400 nm)：使用鈥玻璃(Hollow Cathode Lamp, HCL)的標(biāo)準(zhǔn)特征峰(如279.5 nm、365.0 nm)校準(zhǔn)?！　? 可見區(qū)(400-800 nm)：使用鐠釹濾光片(Pr-Nd Glass)校準(zhǔn)，特征峰為585 nm和800 nm?！　? 校準(zhǔn)時(shí)需將參比溶液(如蒸餾水或空白溶劑)置于樣品池，調(diào)整波長(zhǎng)至標(biāo)準(zhǔn)峰位，誤差應(yīng)小于±0.5 nm?！　∪?、樣品制備與裝載　　1. 比色皿選擇與處理　　- 紫外區(qū)(200-400 nm)：必須使用石英比色皿，避免玻璃對(duì)紫外光的吸收干擾?！　? 可見區(qū)(400-800 nm)：可使用普通玻璃比色皿?！　? 清潔方法：　　- 石英皿：用1:1硝酸浸泡24小時(shí)，清水沖洗后用超純水潤(rùn)洗，再用無(wú)水乙醇擦拭，晾干或氮?dú)獯蹈??！　? 玻璃皿：用洗滌劑清洗，清水沖凈后擦干。　　- 注意：手持比色皿時(shí)，僅觸摸兩側(cè)毛面，避免指紋或油污附著透光面?！　?. 樣品加載　　- 液體樣品需倒入比色皿至約2/3高度，避免過(guò)滿溢出。　　- 固體樣品需配制成均勻懸濁液或溶解液，離心后取上清液測(cè)試?！　? 裝樣后用鏡頭紙輕拭外部水漬，保持透光面清潔?！　∷?、測(cè)量參數(shù)設(shè)置　　1. 波長(zhǎng)范圍與帶寬　　- 根據(jù)樣品特性選擇掃描范圍(如核酸測(cè)260 nm，蛋白質(zhì)測(cè)280 nm)。　　- 帶寬設(shè)置需平衡靈敏度與分辨率：　　- 窄帶寬(0.1-1 nm)：適用于精細(xì)光譜分析(如峰值定位)?！　? 寬帶寬(2-5 nm)：用于快速掃描或低濃度樣品?！　?. 基線校正　　- 以空白溶劑(如蒸餾水、緩沖液)為參比，調(diào)零(調(diào)節(jié)透射率為**或吸光度為0)?！　? 若樣品信號(hào)較弱，可啟用“暗電流校正”功能，**檢測(cè)器噪聲。　　3. 掃描模式與速度　　- 定量分析：固定波長(zhǎng)下測(cè)量吸光度(A)。　　- 定性分析：全波長(zhǎng)掃描(如200-800 nm)，掃描速度建議設(shè)為中速(如200 nm/min)，避免過(guò)快導(dǎo)致信號(hào)失真?！　∥?、測(cè)量操作要點(diǎn)　　1. 比色皿定位　　- 放入樣品池時(shí)，確保比色皿標(biāo)記對(duì)準(zhǔn)光路方向(部分儀器需固定透光方向)?！　? 多樣品測(cè)試時(shí)，按濃度梯度從低到高依次測(cè)量，避免高濃度樣品殘留影響低濃度結(jié)果?！　?. 數(shù)據(jù)記錄　　- 記錄吸光度(A)、透射率(T%)、波長(zhǎng)(λ)及測(cè)試日期、樣品名稱等信息?！　? 重復(fù)測(cè)量3次取平均值，RSD(相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差)應(yīng)小于1%?！　?. 異常處理　　- 若吸光度超出線性范圍(A>1.5或A<0.01)，需稀釋或濃縮樣品后重新測(cè)試?！　? 基線漂移時(shí)，檢查光源強(qiáng)度(氘燈/鎢燈是否老化)、比色皿是否污染或參比溶液是否失效?！　×?、關(guān)機(jī)與維護(hù)　　1. 關(guān)機(jī)步驟　　- 先關(guān)閉氘燈和鎢燈，待散熱風(fēng)扇停止后關(guān)閉主機(jī)電源?！　? 拔下電源插頭，蓋好防塵罩?！　?. 日常維護(hù)　　- 每次使用后清潔樣品室，定期用無(wú)水乙醇擦拭光源窗口和檢測(cè)器窗口?！　? 每月檢查氘燈使用時(shí)長(zhǎng)(通常壽命為1000-2000小時(shí))，及時(shí)更換老化燈泡?！　? 每季度校準(zhǔn)波長(zhǎng)和吸光度準(zhǔn)確性，使用標(biāo)準(zhǔn)溶液(如重鉻酸鉀溶液)?！　?. 長(zhǎng)期存放　　- 儀器內(nèi)放置干燥劑，避免光學(xué)元件受潮霉變。　　- 切斷電源，罩上防塵布，存放于陰涼干燥處?！　∑摺?*注意事項(xiàng)　　1. 避免直視光源，尤其是紫外光，需佩戴防護(hù)眼鏡。　　2. 測(cè)試揮發(fā)性、腐蝕性或有毒樣品時(shí)，應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)操作，并戴手套?！　?. 比色皿清洗廢液需按實(shí)驗(yàn)室規(guī)范處理，禁止隨意傾倒。